Immunoglobulin G (Turbidimetric) Imunoglobulín G (turbidimetrický) (IGGT)

Transkript

1 Immunoglobulin G (Turbidimetric) Imunoglobulín G (turbidimetrický) () Informace pro objednání COBAS INTEGRA 100 Tests Kat. č Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c Immunoglobulin G (Turbidimetric) Systémové-ID použít Serumproteins T Standard 5 0,5mL Kat. č Systémové-ID COBAS COBAS COBAS INTEGRA INTEGRA INTEGRA Precinorm Protein 3 1 ml Kat. č /400 plus Systémové-ID Precipath Protein 3 1mL Kat. č Systémové-ID NaCl Diluent 9% 6 22mL Kat. č Systémové-ID Accelerator I 100 ml Kat. č Systémové-ID COBAS INTEGRA 150 Tests Kat. č Cleaner Cassette Systémové-ID Systémové informace COBAS INTEGRA Immunoglobulin G (Turbidimetric) (). Test, test ID (sérum, plazma); test C, test ID (mozkomíšní mok). Použití In vitro test pro kvantitativní imunologické stanovení lidského imunoglobulínu G v séru, plazmě amozkomíšním moku na systémech COBAS INTEGRA. Souhrn 1,2,3,4,5 Imunoglobuliny chrání lidské tělo proti pronikajícím patogenům aorganizmům. Imunoglobuliny obsahují vazebné místo pro antigen (Fab část) a Fc fragment, kterým se váže na povrch buněk imunitního systému a ke složkám komplementu. Fab část imunoglobulinu rozpoznává antigeny v roztoku (např. toxiny) nebo antigenní domény mikroorganizmů (např.bakterie a viry). Antigenní vazebné místo imunoglobulinu zahajuje přímou neutralizaci toxinů, senzibilizaci imunokompetentních buněk, pokles infekčnosti virů nebo rozvojem zánětlivé reakce. Normálním projevem infekce je nárůst hladin všech imunoglobulinů. Vzestup hladiny IgG provází též autoimunní onemocnění a chronickou hepatitidu. Maligní proliferace buněk, produkujících imunoglobuliny (plazmatické buňky) může způsobit nárůst hladiny jednoho imunoglobulinu (plazmocytoma). Deficit imunoglobulinů může být způsoben syndromem ztráty proteinů, dědičnou dispozicí nebo je sekundárnímprojevemlymfoidníchmalignit. Unemluvňat dochází k poklesu IgG mezi třetím a šestým měsícem, jelikož IgG matky je jen z části nahrazováno aktivní syntézou IgG novorozence. Stanovení IgG v mozkomíšním moku () je využíváno při hodnocení infekcí, včetně centrálního nervového systému, novotvarů nebo primárních neurologických nemocech (především roztroušené sklerózy). Zvýšená koncentrace IgG v může být způsobena buď zvýšenou propustností hematoencefalické bariéry nebo místní, intrathekální produkcí IgG nebo z obou důvodů. Pro přesné určení intrathekální syntézy je nezbytná korekce zvýšené propustnosti bariéry. Přesnějšího stanovení intrathekální produkce IgG je dosahováno korekcí frakce IgG o hodnotu způsobenou zvýšenou propustností podle uvedeného výpočtu 4 : Zkrácený název poměru: IGG-R (0-376) když je použito ALBC IGGR2 (0-179) když je použito ALBC2 Poměr=IgG (mg/l) / Albumin (mg/l) Poměr >0,27 indikuje zvýšenou intrathekální syntézu IgG. Zkrácený název poměru: IGG-I (0-576) když je použito ALBC IGGI2 (0-180) když je použito ALBC2 IgG index = IgG (mg/l) Albumin Ser (g/l) / IgG Ser (g/l) / Albumin (mg/l) Hodnoty indexu >0,7 jsou znamením zvýšené syntézy IgG. Ve >80% případů roztroušené sklerózy přesahuje index 0,7. Je známo, že tzv. paraproteiny sekretované při monoklonálních gamapatiích (monoklonální imunoglogulinemie) jsou odlišné od imunoglobulínů polyklonálního původu, především složením aminokyselin a velikostí. To může znamenat zhoršení jejich vazby na protilátku a snížení správnosti stanovení. Princip testu 6 Imunoturbidimetrické stanovení. Lidské IgG vytváří precipitát se specifickou protilátkou, který je stanoven turbidimetricky při 340 nm. Reagencie - pracovní roztoky R1 T specifická protilátka proti lidskému IgG (králičí) ve fosfátovém pufru, stabilizovaná 0,09% azidem sodným v nádobce A (kapalná). R2 Reagencie pro kontrolu nadbytku antigenu. IgG v ředěném séru (lidské) stabilizované 0,09% azidem sodným v nádobce C (kapalné). Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v tomto příbalovém letáku, v kapitole 1, Úvod, obzvláště pak bodu 2 (materiály lidského původu) a bodu 6 (azid sodný). Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití , V 5 CS 1 /5

2 Specifické proteiny Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2 až 8 C Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus Na palubě při C 12 týdnů Systémy COBAS INTEGRA 700/800 Na palubě při 8 C 12 týdnů Viz datum exspirace na štítku obalu cobas c Odběr vzorků apříprava Pro odběr apřípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou vhodné ke stanovení. Sérum. Plazma: Li-heparinová nebo EDTA plazma. : Zabraňte kontaminaci vzorků krví. Vzorky by měly být odebírány bez kontaminace krví, protože rozdíl v koncentraci celkové bílkoviny v plné krvi a běžném je 1000-násobný. Před analýzou vzorek centrifugujte. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn. že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémyodběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Vzorky a kontroly jsou automaticky přístrojem předředěny roztokem NaCl. Stabilita v séru/plazmě: 7 Stabilita v: 7 4měsíce při15-25 C 8měsíců při 2-8 C 8měsíců při (-15)-(-25) C 1denpři C 7dnípři 2-8 C Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením testu. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) 1., C NaCl 9% (10x koncentrovaný isotonický roztok) pro automatické ředění vzorků a řady standard. Použijte NaCl Diluent 9%, Kat. čís , Systemové-ID nebo připravte roztok 9% NaCl z komerčně dostupných tablet chloridu sodného nebo z koncentrovaného fyziologického roztoku. Roztok 9% NaCl je stabilní 28 dní na palubě analyzátorů COBAS INTEGRA 400/400 plus/700/ , C COBAS INTEGRA Cleaner Cassette, Kat. čís , System-ID Je doporučeno používat extra mycích cyklů při používání určitých kombinací testů vsystémechcobasintegra. Pro více informací ohledně kombinace testu a dodatečného cyklu mytí viz kapitolu 1, Úvod, Část III. 3. C Akcelerátor I jako speciální diluent (SD). Stabilitanapalubě při užití:7dní. 4. C na analyzátorech COBAS INTEGRA 700/800 COBAS INTEGRA Cleaner Cassette, Kat. čís , System-ID , ISE-Deproteinizer, Kat. čís Doporučujeme zařadit Extra wash cycle test (EWC-S, 0-989), jak je popsán v Příručce metod, Úvod, Část III, před provedením série stanovení. Všechny doplňující reagencie jsou umístěny v předdefinovaných pozicích stojánku. Stanovení Nejvhodnějšího provedení stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce specifické pro jednotlivé analyzátory vyhledejte v návodu k použití. Aplikace pro sérum, plazmu a COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Koncový bod Směr reakce Nárůst Reakci startuje Vzorek Kontrola nadbytku antigenu Ano (v R2) Sérum a plazma D-R1-S-R2 Vlnová délka A 340 nm Výpočet první/posl. T 0 /33 >94 g/l (>9400 mg/dl nebo >627 µmol/l) Faktor předředění 21 g/l R1-SD/S-R2 Vlnové délky A/B 340/652 nm Výpočet první/posl. T 0 /33 >405 mg/l (>40,5 mg/dl nebo >2701 nmol/l) Faktor předředění Ne mg/l Pipetovací parametry Sérum, plazma Diluent (H 2 O) R1 140 µl 5 µl Vzorek 2µL 20µL R2 5 µl 5 µl Celkový objem 177 µl Diluent (H 2 O) R1 100 µl 5 µl Vzorek 25 µl Speciální diluent (SD) 30 µl R2 5 µl 25 µl Celkový objem 190 µl COBAS INTEGRA 700/800 definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Koncový bod Směr reakce Nárůst Reakci startuje Vzorek Kontrola nadbytku antigenu Ano (v R2) Sérum a plazma D-R1-S-R2 Vlnová délka A 340 nm Výpočet první/posl. T 0 /44 >70 g/l (>7000 mg/dl nebo >467 µmol/l) Faktor předředění 21 g/l 2 / , V 5 CS

3 Specifické proteiny R1-SD/S-R2 Vlnové délky A/B 340/652 nm Výpočet první/posl. T 0 /44 >405 mg/l (>40,5 mg/dl nebo >2701 nmol/l) Faktor předředění Ne mg/l Pipetovací parametry Sérum, plazma Diluent (H 2 O) R1 140 µl 5 µl Vzorek 2µL 20µL R2 5 µl 5 µl Celkový objem 177 µl Diluent (H 2 O) R1 100 µl 5 µl Vzorek 25 µl Speciální diluent (SD) 30 µl R2 5 µl 25 µl Celkový objem 190 µl Kalibrace Kalibrátor Serumproteins T Standard Poměr ředění kalibrátoru Sérum, plazma 1:6, 1:12, 1:24, 1:48, 1:96 prováděno automaticky přístrojem 1:150, 1:300, 1:600, 1:1200, 1:2400 prováděno automaticky přístrojem Typ kalibrace Logit/log 5 Opakování kalibrace Doporučen duplikát Kalibrační interval Každá šarže a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Zadejte cílovou hodnotu IgG neředěného kalibrátoru, specifickou podle šarže, jež je uvedena v příbalovém letáku Serumproteins T Standard. Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle referenčního materiálu IFCC/BCR/CAP pro 14 sérových proteinů CRM 470 (RPPHS 91/0619). 8 Kontrola kvality Kontrola kvality séra, plazmy Referenční rozmezí Precinorm Protein Patologické rozmezí Precipath Protein Kontrola kvality Kvantitativní kontroly jsou doporučeny pro rutinní kontrolu kvality. Kontrolní interval Doporučeno 24 hodin Pořadí kontrol Určeno uživatelem Kontrola po kalibraci Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Výpočet Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají koncentraci analytu pro každý vzorek. Pro více informací viz kapitolu 7, Data Analysis (Zpracování dat), návod k použití (analyzátor COBAS INTEGRA 700) nebo Data analysis (Zpracování dat) v Online Help (nápovědě) (COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). Převodní faktory 9 : g/l x 6,67 = µmol/l g/l x 100 = mg/dl mg/l x 6,67 = nmol/l Molekulová hmotnost: Omezení - interference Koncentrace IgG v séru je mnohem vyšší než ve vzorcích. Kvůli zajištění vysoké citlivosti používá aplikace pro likvor 25 µl neředěného vzorku. Proto je tato aplikace náchylná k přenosu IgG mezi vzorky. V rámci omezení možnosti carry-over doporučujeme provádět stanovení ve vzorcích na analyzátorech COBAS INTEGRA 700/800 v sériích. Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ±10% počáteční hodnoty. Sérum, plazma Hemolýza Bez významných interferencí. Žloutenka Bez významných interferencí. Lipemie Bez významných interferencí. Revmatoidní faktory Žádná interference revmatoidních faktorů do koncentrace 800 IU/mL. Ostatní Stejně jako jiné turbidimetrické nebo nefelometrické postupy, nemusí tento test poskytovat správné výsledky u pacientů s monoklonální gamapatií, protože mají individuální vlastnosti, které mohou být vyhodnoceny elektroforeticky. 10 Pro diagnostické účelyjevždynezbytnépoužívat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. Rozsah měření Sérum/plazma 3,0-37,2 g/l ( mg/dl nebo 20,0-248 µmol/l) Rozšířený rozsah měření (vypočítaný) Faktor postdiluce: 4,7 doporučeno Faktor následné koncentrace: 4 doporučeno 0,8-175 g/l ( mg/dl nebo 5, µmol/l) Spodní detekční limit 3,0 g/l (300 mg/dl nebo 20,0 µmol/l) Detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako 3-násobek standardní odchylky od vzorku s nulovou hodnotou (nulový vzorek + 3 SD, přesnost v sérii, n = 30). 2,0-70,9 mg/l (0,20-7,09 mg/dl nebo 13,3-473 nmol/l) Rozšířený rozsah měření (vypočítaný) Faktor postdiluce: 10 doporučeno 2,0-709 mg/l (0,20-70,9 mg/dl nebo 13, nmol/l) Spodní detekční limit 2,0 mg/l (0,20 mg/dl nebo 13,3 nmol/l) Detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako 3-násobek standardní odchylky od vzorku s nulovou hodnotou (nulový vzorek + 3 SD, přesnost v sérii, n = 21) , V 5 CS 3 /5

4 Specifické proteiny Očekávané hodnoty Sérum/plazma g/l mg/dl µmol/l Dospělí ,7-106,7 Děti a mládež rok 2,32-14, ,5-94,0 1-3 roky 4,53-9, ,2-61,1 4-6 let 5,04-14, ,6-97,6 7-9 let 5,72-14, ,2-98, let 6,98-15, , let 7,59-15, , let 7,16-17, , let 5,49-15, , IgG IgG index 4 0,3-0,7 IgG/ALB poměr 4 <0,27 6,3-33,5 mg/l (0,63-3,35 mg/dl nebo 42,0-223 nmol/l) Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje pro sérum/plazmu () Údaje získané na systémech Roche COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena analýzou lidských vzorků a kontrol podle interního postupu (v sérii n = 20, mezi sériemi n = 20). Byly získány následující výsledky: Level 1 Level 2 Průměr 10,2 g/l 24,5 g/l (1020 mg/dl nebo 68,0 µmol/l) (2450 mg/dl nebo 163 µmol/l) VK v sérii 0,94% 1,4% VK mezi sériemi 2,1% 1,9% Porovnání metod HodnotyIgGprovzorkyséraaplazmy,získanéna analyzátoru COBAS INTEGRA 700 použitím reagencie COBAS INTEGRA Immunoglobulin G (Turbidimetric), byly porovnány s hodnotami stanovenými komerčně dostupnými reagenciemi pro IgG na analyzátoru COBAS INTEGRA 700 a na alternativním biochemickém systému (turbidimetrické stanovení). Vzorky byly měřeny v duplikátu. Počet (n) představuje všechny replikáty. COBAS INTEGRA 700 Alternativní systém Počet vzorků (n) Korel. koeficient (r) 0,998 0,969 (r s ) 0,997 0,963 Lin. regrese y = 0,97x + 0,23 g/l y = 0,99x - 0,32 g/l Passing/Bablok 14 y = 0,97x + 0,20 g/l y = 1,03x - 0,69 g/l Hodnotybylyvrozmezí4,8až15,9g/L (480 až 1590 mg/dl nebo 32,0 až 106 µmol/l). Specifické technické údaje pro mozkomíšní mok (C) Údaje získané na systémech Roche COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena analýzou lidských vzorků a kontrol podle interního postupu (v sérii n = 20, mezi sériemi n = 20). Byly získány následující výsledky: Level 1 Level 2 Průměr 34,5 mg/l 54,1 mg/l (3,45 mg/dl nebo 230 nmol/l) (5,41 mg/dl nebo 361 nmol/l) VK v sérii 1,2% 1,8% VK mezi sériemi 1,7% 2,2% Porovnání metod Hodnoty IgG pro vzorky lidského, získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 700 použitím reagencie COBAS INTEGRA Immunoglobulin G (Turbidimetric), byly porovnány s hodnotami stanovenými komerčně dostupnými reagenciemi pro IgG na alternativním biochemickém systému (nefelometrický analyzátor). Počet vzorků (n) 97 Korel. koeficient (r) 0,996 (r s ) 0,991 Lin. regrese y = 0,99x - 1,02 mg/l Passing/Bablok 14 y = 0,97x + 0,08 mg/l Rozmezí hodnot od 2,7 až 459 mg/l (0,27 až 45,9 mg/dl nebo 18,0 až 3062 nmol/l). Odkazy 1. Brostoff J, Scadding GH, Male D, Roitt IM. Clinical Immunology. London: Gower Medical Publishing 1991: Bodansky O, Latner AL. Advances in Clinical Chemistry. New York: Academic Press 1971;14: Tietz NW, ed. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders 1995: Silverman LM, Christenson RH. Amino acids and proteins. In: Burtis CA, Ashwood ER, eds. Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry. 4th ed. Philadelphia: WB Saunders 1996: Tibbling G, Link H, Ohman S. Principles of albumin and IgG analyses in neurological disorders I. Scand f Clin Lab Invest 1977;37: Becker W, Rapp W, Schenk HG, Störiko K. Methoden zur quantitativen Bestimmung von Plasmaproteinen durch Immunpräzipitation. Z Klin Chem Klin Biochem 1968;6: Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO Publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev Johnson AM. A new international reference preparation for proteins in human serum. Arch Pathol Lab Med 1993;117: Young DS, Huth EJ. SI Units For Clinical Measurement. American College of Physicians, Attaelmannan M, Levinson SS. Understanding and Identifying Monoclonal Gammopathy. Clin Chem 2000;46: Schumann G, Dati F. Vorläufige Referenzbereiche für 14 Proteine im Serum (für Erwachsene) nach Standardisierung immunchemischer Methoden unter Bezug auf das internationale Referenzmaterial CRM 470. Lab Med 1995;19: Lockitch G, Halstead AC, Quigley G, MacCallum C. Age- and sex-specific pediatric reference intervals: study design and methods illustrated by measurement of serum proteins with the Behring LN Nephelometer. Clin Chem 1988;34: / , V 5 CS

5 Specifické proteiny Reiber H. The discrimination between different blood- barrier dysfunctions and inflammatory reactions of the CNS by a recent evaluation graph for the protein profile of cerebrospinal fluid. J Neurol. 1980;224: Reference values are adapted to IFCC/BCR/CAP reference preparation CRM 470 (RPPHS 91/0619) by applying a conversion factor of Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: Významné doplňky nebo změny jsou označeny prouhou podél textu Roche Diagnostics. Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim , V 5 CS 5 /5