Monitorování hladin etoposidu a topotekanu pomocí kapalinové chromatografie při periokulární a intravitreální aplikaci v terapii retinoblastomu

Transkript

1 Monitorování hladin etoposidu a topotekanu pomocí kapalinové chromatografie při periokulární a intravitreální aplikaci v terapii retinoblastomu Klapková E 1., Petrušková D 2., Pochop P 2., Průša R 1. 1) Ústav lékařské chemie a klinické biochemie 2) Oční klinika dětí a dospělých 2. LF UK a FN Motol

2 Retinoblastom primární zhoubný nádor sítnice, který vychází zembryonálních nediferencovaných i diferencovaných retinoblastů 70 % jednostranné nádory, většinou na podkladě nedědičné somatické mutace charakteristika: rychlý růst, záhy vyplňuje sklivcovou dutinu, po úplném postižení bulbu prorůstá do orbity, optického nervu a do CNS

3 aplikace cytostatik přímo do nádoru projevy: strabismus, leukokorie (Beerův příznak) zornice - světlá, šedobílá či nažloutlá, ztuhlá amauroticky metastázy: kostní dřeň, kosti, plíce, CNS možnosti léčby: laserová terapie chirurgická léčba radioterapie chemoterapie

4 Současná terapie pokročilých forem retinoblastomu Pokročilá forma retinoblastomu = skupina C a D podle International Intraocular Retinoblastoma Classification (IRC, ABC klasifikace) Murphree, 2005 = skupina IV a V podle Reese-Ellsworth CHEMOREDUKCE + LOKÁLNÍ OČNÍ TERAPIE: úspěch v 85 % (IRC A,B) x v 47 % (IRC C,D)* zvýšení úspěšnosti záchranné terapie: Intenzifikace chemoterapie Lokální aplikace chemoterapie

5 Etopozid Topotekan derivát podofylotoxinu s glykosidicky navázanými substituenty Aplikace nádory plic, pleury, mediastina, trávicí trubice, gynekologické nádory, retinoblastom Vedlejší účinky nausea, zvracení, hematotoxicita (leukopenie, trombopenie) derivát kamptotecinu Aplikace karcinom plic, ovárií, retinoblastom Vedlejší účinky nausea, zvracení, průjem, obstipace, mukozitida hematotoxicita (leukopenie, trombopenie, neutropenie, anémie)

6 ? účinné, netoxické, snesitelné koncentrace Cíl stanovení koncentrací sklivec, periferní krev výpočet AUC (Cílová AUC ve sklivci pro etoposid 2 : μg/ml.h Cílová AUC ve sklivci pro topotekan 3 : 0,12 0,18 μg/ml.h) sledování toxicity etopozidu a topotekanu najít ideální techniku a způsob aplikace cytostatik na modelu králičího bulbu 2 Lowis SP, Price L et al. (1998). A study of the feasibility and accuracy of pharmacokinetically guided etoposide dosing in children. Br J Cancer 77: Stewart CF, Iacono LC et.al. (2004). Results of a phase II upfront window of pharmacokinetically guided topotecan in high-risk medulloblastoma and supratentorial primitive neuroectodermal tumor. J Clin Oncol 22:

7 Metody "In vivo" experiment byl schválen etickou komisí pro ochranu zvířat podle vyhlášky č.207/2004 s.11 Ministerstva zemědělství České Republiky 24 zdravých, dospělých Novozélandských bílých králíků Samci o váze 2,59 ± 0.38 kg Levé bulby byly u všech králíků ponechány bez aplikace jako bulby kontrolní

8 Aplikace etopozidu 2,5 mg ET periokulárně 0,5 mg ET intravitreálně Metody Periokulární aplikace Aplikace topotekanu 1 μg topotekanu intravitreálně 2 μg topotekanu intravitreálně Odběr vzorků (sklivec, plazma) 1., 2., 6. hodině 1., 2., 7., 14. den 3. týden Intravitreální aplikace

9 Kapalinový chromatograf Agilent 1200 degasser kvartérní pumpa autosampler termostat kolon DAD detektor

10 HPLC - Etopozid příprava vzorku 200 μl vzorku + 20 μl I.S. (difenylhydantoin) protřepat přidat 5 ml dichlormetanu 5 min třepat centrifugace (5 min, 3000 ot/min) odpipetovat 4 ml org. vrstvy sušení při 37 C rozpuštění odparku ve 100 μl MF Chromatografické podmínky DAD detektor, 229 nm MF: ACN:metanol:voda (45:20:35) průtok MF: 1,0 ml/min kolona: kolona Supelcosil LC-18, 15 cm x 4,6 mm x 5µm t: laboratorní

11 Záznam analýzy etopozid I.S. Kato Y. et al., Journal of Chromatography 57, 21-24, 2003

12 Koncentrace etopozidu ve sklivci při intravitreální aplikaci

13 Koncentrace etopozidu v plazmě

14 HPLC - Topotekan příprava vzorku 100 μl vzorku μl metanolu 10 s třepat centrifugace (5 min, ot/min, 4 C) 50 μl nástřik Chromatografické podmínky DAD detektor, 267 nm MF: ACN:0,01 M KH 2 PO 4 (85:35) průtok MF: 1,5 ml/min kolona: Inertsil ODS 3V, 15 cm x 4,6 mm x 5µm t: 25 C

15 Záznam analýzy topotekan

16 Koncentrace topotekanu ve sklivci při intravitreální aplikaci

17 Koncentrace topotekanu v plazmě při intravitreální aplikaci

18 Koncentrace topotekanu v levém oku při intravitreální aplikaci 2 μg 0,16 0,14 0,12 koncentrace (ug/ml) 0,1 0,08 0,06 0,04 0, králíci 4 5 6

19 VÝSLEDKY Etopozid Periokulárně Sklivec: nulová koncentrace Plazma: 1,9 7,7 μg/ml AUC: 374,7 μg/ml.h Intravitreálně Sklivec: μg/ml Plazma: 1,9 3,2 μg/ml AUC sklivec : 928,7 μg/ml.h AUC plazma : 233,1 μg/ml.h Topotekan Intravitreálně 1 μg Sklivec: 0,24 0,46 μg/ml Plazma: 0 0,36 μg/ml AUC sklivec : 2,155 μg/ml.h AUC plazma : 1,067 μg/ml.h Intravitreálně 2 μg Sklivec: 0,66 1,35 μg/ml Plazma: 0,25 0,81 μg/ml AUC sklivec : 5,338 μg/ml.h AUC plazma : 3,136 μg/ml.h

20 ZÁVĚR peribulbární aplikací nelze docílit terapeutických hladin cytostatik ve sklivci králíka stabilní terapeutické hladiny byly dosaženy intravitreální aplikací transkorneální intravitrealní aplikace se ukázala nejvhodnějším způsobem aplikace cytostatik do sklivcového prostoru králičího bulbu pro snížení rizika diseminace tumoru přímá aplikace cytostatik do sklivce by mohla být u vybraných případů zavedena do praxe Práce byla podpořena granty IGA MZd ČR NR/9532-3/2007 a GAUK 63008

21 Děkuji Vám za pozornost