CSAII. Terapeutické monitorování léků. Informace pro objednání

Transkript

1 Informace pro objednání (100 testů) Systémové ID Cyclosporine Calibrators 0 (1 2.5 ml) 50, 100, 200, 350, 500 (5 2.0 ml) Cyclosporine Calibrator 0 (3 2.5 ml) COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent (4 40 ml) Systémové ID Systémové ID Systémové ID Analyzátory, na kterých lze cobas c pack(y) použít COBAS INTEGRA 400 plus COBAS INTEGRA 800 Česky Systémové informace Test, test ID Použití In vitro diagnostický test pro kvantitativní stanovení cyklosporinu A v lidské plné krvi jako pomůcka při léčbě cyklosporinem u pacientů po transplantaci. Souhrn Cyklosporin je cyklický peptid původem z hub a silné imunosupresivum. Od jeho zavedení v roce 1983 se podstatně zlepšilo přežití pacientů a štěpů u pacientů po transplantaci srdce, ledvin, jater,slinivky nebo plic. Mnoho studií dokumentuje účinek cyklosporinu v boji proti rejekci orgánu. Neadekvátní dávky a hladiny cyklosporinu mohou způsobit odmítnutí transplantovaného orgánu. Toxické hladiny cyklosporinu jsou spojené s mnohými vedlejšími účinky, včetně nefrotoxicity, hepatotoxicity a řady dalších komplikací. Lékaři mají obavy zejména z nefrotoxických účinku léčiva u transplantace ledvin kvůli problémům při rozlišování mezi odmítnutím orgánu a cyklosporinovou toxicitou. 1,2 Monitorování koncentrací původní formy cyklosporinu v plné krvi a jejich interpretace ve spojení s dalšími laboratorními údaji a klinickými projevy jsou nejefektivnější způsoby zajištění odpovídající imunosupresivní léčby pro příjemce transplantovaných orgánů. Jelikož se léčivo rychle distribuuje do červených krvinek, je při výběru pro stanovení cyklosporinu plná krev vhodnější než plazma. Koncentrace cyklosporinu by se měly stanovovat použitím metody, která je specifická pro původní formu léčiva, protože přínos více než 30 metabolitů cyklosporinu k imunosupresi nebo toxicitě zůstává nejistý. Historicky používané metody k monitorování koncentrací cyklosporinu v krvi zahrnují vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii (HPLC), radioimunoanalýzu (RIA) a fluorescenční polarizační imunoanalýzu (FPIA). Princip testu Enzyme Multiplied Immunoassay Technique (EMIT) Reagencie COBAS INTEGRA je homogenní enzymové imunostanovení, které se používá pro analýzu cyklosporinu v plné krvi. Stanovení obsahuje myší monoklonální protilátky s vysokou specifičností na cyklosporin. Reagencie COBAS INTEGRA je založená na kompetici o vazebná místa protilátek cyklosporinu. Cyklosporin ve vzorku soutěží s cyklosporinem v reagencii Enzyme, která je označená enzymem glukóza 6 fosfátdehydrogenázou (G6PDH). Aktivní (nenavázaný) enzym konvertuje zoxidovaný nikotinamid adenin dinukleotid (NAD) v reagencii Antibody na NADH, což způsobí změnu kinetické absorbance, kterou lze změřit spektrofotometricky. Aktivita enzymu klesá po navázání na protilátku, což umožňuje, aby byla koncentrace cyklosporinu ve vzorku měřena jako enzymatická aktivita. Endogenní sérum G6PDH neinterferuje, protože koenzym NAD pracuje jen s bakteriálním (Leuconostoc mesenteroides) enzymem použitým ve stanovení. Před testováním se stanovením COBAS INTEGRA musí být vzorky, kalibrátory a kontroly předpřipraveny použitím COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent. Reagencie lyzuje buňky, extrahuje cyklosporin a precipituje krevní proteiny. Předpřipravené vzorky jsou centrifugované a alikvotní část výsledného supernatantu obsahující cyklosporin je poté testovaná použitím stanovení COBAS INTEGRA. Reagencie - pracovní roztoky R1 SR Reagencie s protilátkou Monoklonální protilátky (myší) proti cyklosporinu, nikotinamid adenin dinukleotid, glukóza 6 fosfatáza, chlorid sodný, objemové činidlo, surfaktant a konzervans včetně 0.1 azidu sodného a streptomycin sulfátu. Reagencie s enzymy Cyklosporin označený bakteriální (Leuconostoc mesenteroides) glukózo 6 fosfátdehydrogenázou, TRIS pufr, objemová činidla, stabilizátory a konzervans včetně 0.1 azidu sodného a streptomycin sulfátu. R1 je v pozici B a SR je v pozici C. Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v části 1 / Úvod této Příručky metod. Pro USA: Pouze na předpis. Zacházení s reagenciemi Připravena k použití Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2 8 C Systém COBAS INTEGRA 400 plus Na palubě při použití při C Systém COBAS INTEGRA 800 Na palubě při použití při 8 C Čtěte datum exspirace na štítku balení cobas c pack 4 týdny 4 týdny Reagencie nezmrazujte ani nevystavujte teplotám nad 27 C. Kalibrátory cyklosporinu se přepravují na suchém ledu a musí se skladovat zmrazené. Před prvním použitím nechte kalibrátory nejméně 1 hodinu roztát na pokojovou teplotu. Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte pouze vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testované a jsou přijatelné: Plná krev Jediným přijatelným antikoagulantem je EDTA. Testovaný vzorek by neměl překročit 54 hematokritu. Farmakokinetické faktory ovlivňují správný čas odběru vzorků po poslední dávce. Tyto faktory zahrnují dávkování, způsob podání, průvodní léčbu a biologickou variabilitu ovlivňující hladinu léčiva. Pro stanovení cyklosporinu se doporučuje nízký vzorek. Heparinizované vzorky se nedoporučují, protože během skladování se mohou vytvářet sraženiny. Používejte čerstvé vzorky. Pokud mají být vzorky testované do 8 hodin od odběru, lze je skladovat při pokojové teplotě C. Chlazené je lze skladovat při teplotě 2 8 C po dobu až 1 týdne. Pokud je potřebné delší skladování, lze vzorky zmrazit při 20 C. Je-li skladován při 20 C, pak je cyklosporin ve vzorcích plné krve stabilní po dobu nejméně 3 měsíců. 3,4 1 / 5

2 Před testováním zmrazené vzorky rozmrazte a důkladně promíchejte. Zabraňte opakovanému mrazení a rozmrazování. Při pipetování se vyhněte nerozpustným látkám, které se mohou vytvořit, jsou-li vzorky zmrazené. POTŘEBNÝ KROK Kalibrátory, kontroly anebo vzorky musí být před analýzou předpřipraveny reagencií COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent, Kat. č , systémové ID Dodržujte kroky uvedené v pokynech k použití reagencie COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent pro předpřípravu kalibrátorů, kontrol anebo vzorků. Technická upozornění jsou důležitou částí pokynů a musí být důkladně přečtena před vykonáním každého kroku. Zřeďování vysokých vzorků Vysoké vzorky (> 500 ) by měly být ředěny buď nulovým kalibrátorem nebo cyklosporinovou negativní EDTA plnou krví. 1. Před použitím jemně, ale důkladně obracejte nebo třeste vysoký vzorek plné krve a diluent (nulový kalibrátor nebo plná krev neobsahující cyklosporin ošetřená s EDTA). 2. Smíchejte 1 díl vysokého vzorku plné krve s 2 díly diluentu. 3. Zředěný vzorek jemně, ale důkladně promíchejte opakovaným převrácením. 4. Naředěný vzorek předpřipravte dodržováním kroků popsaných v pokynech k použití reagencie COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent. 5. Pro získání hodnoty koncentrace cyklosporinu analyzujte vzorek a výsledek vynásobte x3. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Pro předpřípravu kalibrátorů, kontrol anebo vzorků použijte reagencii COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent, kat. č , systémové ID Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro příslušný analyzátor. Pokyny ke stanovení specifické pro analyzátor vyhledejte v příslušném návodu k použití. Aplikace pro plnou krev Definice testu COBAS INTEGRA 400 plus Způsob měření Způsob výpočtu abs. Způsob reakce Směr reakce Vlnové délky A/B Absorbance Kinetický R1-S-SR Nárůst 340/378 nm Výpočet první/posl. 50/102 Faktor postdiluce Jednotka Ne Cyklosporin se stanovuje jako test s dlouhou analýzou (trvání přibl. 17 minut). Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 65 µl 2 µl Vzorek 9 µl 11 µl SR 26 µl 14 µl Celkový objem 127 µl Definice testu COBAS INTEGRA 800 Způsob měření Způsob výpočtu abs. Absorbance Kinetický Způsob reakce Směr reakce Vlnové délky A/B R1-S-SR Nárůst 340/378 nm Výpočet první/posl. 74/170 Faktor postdiluce Jednotka Ne Cyklosporin se stanovuje jako test s dlouhou analýzou (trvání přibl. 17 minut). Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 65 µl 2 µl Vzorek 9 µl 11 µl SR 26 µl 14 µl Celkový objem 127 µl Kalibrace Kalibrátor Cyklosporinové konc. Mód kalibrace Logit/log 4 Opakování kalibrace Odchylka nízká/vysoká Kalibrační interval Cyclosporine Calibrators 0, 50, 100, 200, 350, 500 (0, 41.6, 83.3, 167, 291, 416 nmol/l) Doporučen duplikát < 10 at 50 (41.6 nmol/l) Každý cobas c pack a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Kalibrační křivka musí být vytvořena použitím Cyclosporine Calibrators. Kalibrátory musí být umístěny podle hodnot od nejvyšší (F) jako první, po nejnižší (A) do CAL/QC stojánku. Vytvořená křivka je uložena v paměti systému COBAS INTEGRA a podle potřeby znovu vyvolána. Návaznost: Cyclosporine Calibrators jsou připravovány tak, aby obsahovaly známé množství cyklosporinu v normálním lidském séru a měly návaznost na USP referenční standardy. Kontrola kvality Kontrola kvality Kontrolní interval Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci BIO-RAD Lyphochek Whole Blood Immunosuppressant Controls S každou sérií vzorku pacienta Určeno uživatelem Doporučena Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaná nápravná opatření pro případ, že hodnoty překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají koncentraci analytu pro každý vzorek. Pro více informací čtěte, prosím, Data Analysis v Online nápovědě (analyzátory COBAS INTEGRA 400 plus/800). Převodní faktor: = nmol/l Omezení - interference Informace o látkách testovaných tímto stanovením jsou uvedené v části "Specifické údaje o využití" tohoto dokumentu. Existuje možnost, že test mohou rušit jiné látky anebo faktory, a způsobit chybné výsledky (např. technická chyba nebo chyba postupu). COBAS INTEGRA cobas c pack je určený pro diagnostické použití in vitro při měření cyklosporinu v plné krvi. Toto stanovení není určeno pro stanovení cyklosporinu v séru nebo plazmě. Při posuzování vzorku s nízkou koncentrací, který následuje po vzorku s koncentrací cyklosporinu vyšší než 500, by se mělo přihlédnout k možnému přenosu analytu ("carry-over"). Množství přenosu se liší přístroj od přístroje. 2 / 5

3 Pro minimalizaci přenosu analytu řádně udržujte váš přístroj a zařízení pro manipulaci se vzorky a pečlivě dodržujte postup stanovení. Kritérium: Výtěžnost v rámci ± 10 počáteční hodnoty při koncentraci cyklosporinu 85 (70.8 nmol/l). Ikterus: Bez významných interferencí do koncentrace bilirubinu 855 µmol/l nebo 50 mg/dl. Hemolýza: Bez významných interferencí nad hranicí hematokrytu od Lipémie: Bez významných interferencí do koncentrace triglyceridů 1500 mg/dl. Kys. močová: Bez významných interferencí do koncentrace kys. močové 20 mg/dl. Cholesterol: Bez významných interferencí do koncentrace cholesterolu 500 mg/dl. Ve velmi vzácných případech gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), může způsobit nespolehlivé výsledky. 5 Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Při zpracovávání určitých kombinací testů na analyzátorech COBAS INTEGRA je použití speciálních mycích cyklů povinné. Pro další pokyny a pro nejnovější verzi seznamu Extra mycích cyklů čtěte, prosím, metodický list CLEAN. Tam, kde se to vyžaduje, musí být před vykazováním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry-over). Meze a rozmezí Měřící rozsah ( nmol/l) Dolní meze měření Mez detekce testu: 15 (12.5 nmol/l) Mez detekce představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nulového kalibrátoru s 95 pravděpodobností. Byl měřen použitím nulového kalibrátoru. Výsledek byl získaný na všech analyzátorech COBAS INTEGRA. Očekávané hodnoty Pro cyklosporin v plné krvi neexistuje pevné terapeutické rozmezí. Celkový klinický stav, individuální rozdíly v citlivosti na imunosupresivní a nefrotoxické účinky cyklosporinu, podávání dalších imunosupresantů, typ transplantace, doba po transplantaci a množství dalších faktorů přispívá k rozdílným požadavkům pro optimální hladiny cyklosporinu v krvi. Individuální hodnoty cyklosporinu nemohou být použity jako jediný indikátor pro změny ve způsobu léčby. Každý pacient by měl být před úpravou léčby důkladně klinicky vyhodnocen a každý, kdo používá stanovení, si musí stanovit vlastní rozmezí založené na klinických zkušenostech. Toto rozmezí se bude lišit dle použitého komerčního diagnostického in vitro testu. Rozmezí musí být stanoveno pro každý použitý komerční test. Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů, a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické údaje o využití Reprezentativní údaje o využití pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla stanovena použitím Bio-Rad Lyphochek Whole Blood Controls dle požadavků směrnic CLSI EP05 A2 6 s opakovatelností (n = 84) a mezilehlou precizností (2 alikvoty na sérii, 2 série denně, 21 dní). Následující výsledky byly získány na analyzátoru COBAS INTEGRA 400: Hladina (75.5) 6.1 (5.1) 6.7 Hladina (154) 8 (6.7) 4.6 Hladina (288) 18 (15.0) 5.1 Mezilehlá preciznost Hladina (75.5) 9.0 (7.5) 9.9 Hladina (154) 13 (10.8) 6.9 Hladina (288) 24 (20.0) 6.9 Následující výsledky byly získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 800: Hladina (77.2) 6.9 (5.7) 7.5 Hladina (159) 10 (8.3) 5.2 Hladina (298) 19 (15.8) 5.2 Mezilehlá preciznost Hladina (77.2) 10 (8.3) 11.1 Hladina (159) 14 (11.7) 7.5 Hladina (298) 21 (17.5) 6.0 Porovnání metod Stanovení COBAS INTEGRA Cyclosporine a COBAS INTEGRA s COBAS INTEGRA Cyclosporine Pretreatment Reagent byly na analyzátoru COBAS MIRA porovnány s komečně dostupným EMIT stanovením, použitím jak metody extrakce metanolem (MeOH), tak i komerčně dostupné reagencie EMIT k předpřípravě vzorků před stanovením cyklosporinu. Stanovení COBAS INTEGRA Cyclosporine a COBAS INTEGRA vykazovaly v porovnání se stanovením EMIT Cyklosporin ekvivalentní využitelnost. Reprezentativní údaje ze srovnání jsou zobrazené níž. Vzorky použité pro srovnání metod byly z 277 vzorků plné krve odebrané od pacientů po transplantaci. V některých případech mohl být víc než 1 vzorek odebrán od stejného pacienta, v různé době po transplantaci. Vzorky byly zmrazené při 20 C a analyzované do 1 měsíce od odběru. Z 277 vzorků jich 14 ze srovnání MeOH a 15 ze srovnání nové předpřípravy obsahovalo koncentrace cyklosporinu < 40 (citlivost EMIT) nebo > 500 (testovací mez) a byly vynechány ze statistické analýzy. Zbývající vzorky byly od pacientů po transplantaci jater (24 vzorků), srdce (93 vzorků) a ledvin (145 vzorků pro porovnání analyzátoru COBAS INTEGRA 700 Cyclosporine vs. EMIT s reagencií pro předpřípravu vzorků nebo 146 vzorků pro porovnání analyzátoru COBAS INTEGRA 700 Cyclosporine vs. EMIT s extrakcí metanolem). Statistická analýza použitím Demingovy regresivní metody je zobrazena níže. EMIT MeOH EMIT Sample Pretreatment Reagent Počet vzorků Rozmezí hodnot min max Sklon interval spolehlivosti dolní mez horní mez Úsek na ose () / 5

4 95 interval spolehlivosti dolní mez horní mez Korelační koeficient Stejná skupina dat je zobrazena níž v Bland-Altmanově grafu. Analyzátor COBAS INTEGRA 700 Cyclosporine vs. EMIT s extrakcí metanolem N = 263 Průměr (Y-X) = -0.3 (Y-X) = = 46.0 Průměr + 2 = 45.7 Průměr - 2 = Analyzátor COBAS INTEGRA 700 Cyclosporine vs. EMIT s reagencií pro předpřípravu vzorků N = 262 Průměr (Y-X) = 0.4 (Y-X) = = 48.5 Průměr + 2 = 48.9 Průměr - 2 = Analytická specifičnost 3 Následující metabolity, křížově reagující látky a strukturálně podobné nebo potenciálně spolupodávané sloučeniny byly vyhodnocené na systémech COBAS INTEGRA v poolu normální lidské plné krve s EDTA s přídavkem 200 (166.5 nmol/l) cyklosporinu. Každá látka byla testována při koncentraci 10krát převyšující terapeutické nebo normální rozmezí, dle protokolu popsaného NCCLS. 7 Přihlédnuto bylo i k nepřesnosti stanovení při měření křížové reaktivity. byla označena jako "nedetekovatelná" (ND), jestliže získaná hodnota byla nižší než je citlivost stanovení. () = 100 (analytický výsledek - koncentrace analytu) koncentrace interferentu (AM9) M (AM19) M (AM1) M ND (AM4N) M ND = nedetekovatelné Acetaminofen 200 ND Albuterol 0.18 ND Allopurinol 600 ND Alprazolam 0.37 ND Amfoteracin B 20 ND Atenolol 40 ND Azathiopoprin 10 ND Kaptopril 50 ND Karbamazepin 120 ND Ceflacor 230 ND Chloramfenikol 250 ND Cimetidin 100 ND Cyklofosfamid 250 ND Digoxin 0.02 ND Dipyridamol 25 ND Disopyramidin 30 ND Erytromycin 200 ND Furosemid 20 ND Gancyklovir 400 ND Gentamicin 120 ND Heparin 800 U/L ND Hydralazin 32 ND Hydrochlorotiazid 40 ND Izoniazid 70 ND Isoproterenol hydrochlorid 0.06 ND Lidokain 600 ND Metylprednisolon 12 ND Metoklopramid 4 ND K. mykofenolová 100 ND Naproxen Fenobarbital 150 ND Fenytoin Piperacillin 8 ND Prazosin 3 ND Prednisolon 12 ND Prednison 12 ND Prometazin 10 ND Kys. salicylová 500 ND Sulfamethoxazol 400 ND 4 / 5

5 Theofylin 250 ND Triamteren 2.8 ND Trimethoprim 20 ND Vankomycin 630 ND ND = nedetekovatelné Linearita Pro zjištění linearity stanovení byla připravena série 7stupňového ředění použitím vzorku plné krve pacienta užívajícího cyklosporin ředěný negativní lidskou plnou krví. Výsledky byly vyhodnoceny regresí Passing/Bablok. 8 y = 0.998x r = 1.0 Sklon 95 CI (0.971, 1.02) Úsek na ose 95 CI (-0.610, 11.1) Dolní mez rozmezí = 28.1 Jakákoliv modifikace přístroje, jak je zde uvedeno, vyžaduje validaci laboratoří. Odkazy 1 McMillan MA. Clinical pharmacokinetics of cyclosporine. Pharmac Ther 1989;42: Kahan BD. Cyclosporine. N Engl J Med 1989;321: Schran HF, Rosano TG, Hassell AE, et al. Determination of cyclosporine concentrations with monoclonal antibodies. Clin Chem 1987;33: Wong PY, Mee AV, Glenn J, et al. Quality assessment of cyclosporine monitoring Canadian validations. Transplant Proc 1990;22: Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry assays: mechanisms, detection and prevention. Clin Chem Lab Med 2007;45(9): Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision of Quantitative Measurement Methods:Approved Guideline, EP05 A National Committee for Clinical Laboratory Standards. Interference Testing in Clinical Chemistry; Proposed Guideline. Villanova, PA.: NCCLS; 1986;6(13). NCCLS Publication EP7-P. 8 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Symboly Roche Diagnostics používá následující symboly a znaky, včetně uvedených v normě ISO GTIN Obsah soupravy Objem po rekonstituci nebo promíchání Globální číslo obchodní položky Doplnění, odstranění nebo změny textu jsou označeny pruhem podél textu. 2015, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim Distribuce v USA: Roche Diagnostics, Indianpolis, IN Zákaznická podpora v / 5