SALSA MLPA probemix P378-D1 MUTYH

Transkript

1 SALSA MLPA probemix P378-D1 MUTYH Účel použití Salsa MLPA kit P378 MUTYH je test pro in vitro diagnostiku (IVD) 1 nebo pouze pro výzkumné účely (RUO) a slouží pro detekci delecí nebo duplikací lidských genů MUTYH a GREM1 a ve specifických oblastech genu SCG5. Dále obsahuje dvě sondy, které mohou detekovat přítomnost bodové mutace p.y179c a p.g396d v genu MUTYH. Výrobek je určen k potvrzení potenciální příčiny a klinické diagnózy MUTYH-asociované polypózy (MAP) a dědičného syndromu smíšené polypózy (HMPS1). Tento produkt může být použit pro genetické testování členů/jednotlivců v rizikové rodině. Tento test je určen pro použití s lidskou DNA izolovanou z periferní krve. Delece nebo duplikace detekované kitem P378 MUTYH musí být ověřeny jinou metodou. Zejména delece nebo duplikace detekované pouze jedinou sondou, vždy vyžadují ověření jiným způsobem. Většina defektů v MUTYH genu jsou bodové mutace a většina z nich nebude detekována metodou MLPA. Doporučuje se proto používat tento kit v kombinaci se sekvenační analýzou MUTYH genu. Tento test není určen k použití jako samostatný test pro klinické rozhodování. Výsledky tohoto testu musí být interpretovány molekulárním genetikem nebo ekvivalentním odborníkem. Tento kit může být použit na nádorovém materiálu k detekci delecí a duplikací ve výzkumu. 1 Berte prosím na vědomí, že tento kit je pro in vitro diagnostické použití (IVD) v zemích uvedených v Osvědčení o analýze, které je k dispozici na Ve všech ostatních zemích je výrobek určen pouze pro výzkumné účely (RUO). Klinické pozadí Gen MUTYH (muty homolog, E. coli) kóduje DNA glykosylázu, která se účastní oprav oxidačního poškození DNA. Mutace v tomto genu mají za následek dědičnou predispozici k rakovině tlustého střeva, konkrétně MUTYH asociované polypóze (MAP). MAP je autosomální recesivní znak. Jedna defektní kopie genu MUTYH může vést k žádnému nebo jen malému zvýšení rizika pro kolorektální nádor. V případě bialelického MUTYH defektu, riziko pro kolorektální nádor je 43 % až téměř 100 % bez včasného sledování podle NCBI GeneReview pro MAP. Dvě nejčastější mutace MUTYH spojené s dědičným kolorektálním nádorem jsou p.y179c(c.536a> G) v exonu 7 a p.g396d (c.1187g> A) v exonu 13. Tyto dvě mutace pokryjí přibližně 80% změn

2 zárodečné linie u pacientů evropského původu. Ve východoasijských populacích tyto hotspot mutace nejsou prevalentní. Pacienti s homozygotní p.g396d nebo heterozygotní p.g396d / p.y179c mutací vykazují mírnější fenotyp a pozdější věk nástupu choroby ve srovnání s homozygotními nosiči mutace py179c (NCBI GeneReview for MAP). Třetí běžná mutace je p.e410gfs * 43(c.1227_1228dupGG) mutace (Guarinos et al., 2014, Morak et al., 2014). Bialelický MUTYH-spojený kolorektální nádor se v jedné třetině případů vyskytuje bez polypů. Další informace naleznete v Clinical Utility Gene Card pro MUTYH ( Duplikace 40 kb upstream od genu GREM1 a 3 'konce SCG5 je spojena se zvýšeným rizikem vzniku kolorektálního nádoru. Tento syndrom je známý jako dědičný syndrom smíšené polypózy (HMPS1). Tato duplikace vede ke zvýšení exprese specifické alely GREM1 v epitelu tenkého střeva. Zvýšená exprese GREM1 zřejmě snižuje aktivitu dráhy kostního morfogenetického proteinu (BMP), mechanismus, který je také podkladem tumorgeneze u juvenilní polypózy tenkého střeva (Jaeger et al. 2012). Další duplikace ~ 16 kb v této oblasti byla popsána nedávno u členů rodiny s atypickým FAP (Rohlin et al., 2016). Sedm sond je zahrnuto do kitu P378 k detekci 40 kb duplikace (další informace viz Tabulka 1 a Tabulka 2b). Změny v počtu kopií zjištěné pouze jednou sondou specifickou pro gen SCG5 pravděpodobně nebudou mít vztah k testovanému stavu. Další informace o HMPS1 naleznete na adrese Struktura genu MUTYH gen je umístěný na chromozomu 1p34, pokrývá ~ 11 kb genomové DNA a obsahuje 16 exonů. Sekvence LRG je sekvence LRG_220 a je totožná se sekvencí NCBI NG_ Gen SCG5 je umístěný na chromozomu 15q13, pokrývá ~ 55 kb genomové DNA a obsahuje 6 exonů. NCBI NG sekvence pro gen SCG5 je NG_ K dispozici není žádná LRG sekvence. GREM1 gen, který se také nachází na chromozomu 15q13, pokrývá ~ 17 kb genomové DNA a obsahuje 2 exony. NCBI NS sekvence pro GREM1 gen je NG_ K dispozici není žádná LRG sekvence. Transkripční varianty Sekvence NM_ , viz představuje transkripční variantu alpha5 genu MUTYH. Tato sekvence je referenčním standardem v NCBI RefSeqGene projektu. Translační počátek ATG se nachází v exonu 1 ( ) a stop kodon je umístěný v exonu 16 ( ).

3 Transkript NM_ představuje variantu gamma2 genu MUTYH s alternativním počátečním kodonem ve srovnání s variantou transkriptu alpha5, nacházející se v intronu 1 transkriptu varianty alpha5. Translační počátek ATG je umístěn na v NM_ Transkript NM_ představuje variantu beta3 genu MUTYH a má také alternativní startovací kodon v intronu 1 varianty transkriptu alpha5. Translační počátek ATG je umístěn v rozmezí v NM_ Sekvence NM_ představuje transkripční variantu 1 genu SCG5. Tato sekvence je referenčním standardem v NCBI RefSeqGene projektu. Translační počátek ATG je lokalizován v exonu 2 ( ) a stop kodon je umístěn v exonu 6 ( ). Sekvence NM_ představuje transkripční variantu 1 genu GREM1. Tato sekvence je referenčním standardem v NCBI RefSeqGene projektu. Translační počátek ATG je lokalizován v exonu 2 ( ) a stop kodon je umístěn v exonu 2 ( ). Číslování exonů Číslování exonů použité v tomto popisu kitu P378-D1 a v analýze listu P378-D1 Coffalyser.Net je číslování exonů podle výše uvedených sekvencí LRG a NCBI NG sekvencí. Číslování exonů a použité sekvence NM jsou od 01/2018, ale může být změněna (např. NCBI) po vydání popisu produktu. Číslování exonů MUTYH se změnilo. Od června 2014 jsme přijali NCBI číslování exonů, které je přítomno v sekvenci NG_ pro tento gen, které je podobné LRG číslování exonů (LRG_220). Toto číslování exonů se může lišit od literatury! Číslování exonů použité v předchozí verzi tohoto popisu produktu naleznete v závorkách v Tabulce 2a. Číslování exonů je od 01/2018, ale může být změněno (např. NCBI) po vydání tohoto popisu produktu. Obsah P378-D1 kitu Kit P378-D1 MUTYH obsahuje 47 MLPA sond s amplifikačními produkty mezi 116 a 471 nt. Obsahuje sondy pro geny MUTYH, SCG5 a GREM1. Pro gen MUTYH, kit obsahuje 18 sond pro počet kopií a dvě sondy specifické pro mutace, pro SCG5 a GREM1 je zahrnuto šest sond pro počet kopií. Navíc kit obsahuje 15 referenčních sond. Identita genů detekovaných referenčními sondami je dostupná online a v Tabulce 2c. Tento kit obsahuje devět kontrolních fragmentů, které generují amplifikační produkty mezi 64 a 105 nt: čtyři DNA kvantitativní fragmenty (Q-fragmenty), dva DNA denaturační fragmenty (D-fragmenty),

4 jeden benchmark fragment, a jeden chromozóm X a jeden chromozóm Y-specifický fragment (tabulka níže). Více informací o tom, jak interpretovat výsledky z těchto kontrolních fragmentů, můžete nalézt v MLPA obecném protokolu. MLPA metoda Principy MLPA metody (Schouten et al 2002) jsou popsány v MLPA obecném protokolu. Validace MLPA metody Interní validace MLPA metody na 16 vzorcích DNA ze zdravých jedinců je nezbytná, a to zejména při prvním použití MLPA, nebo při změně zpracování vzorků, metodě extrakce DNA nebo používaného přístroje. Tato validace by měla vykazovat standardní odchylku <0,10 pro všechny sondy v experimentu. Požadavky na vzorky Izolovaná DNA z periferní krve bez nečistot, které ovlivňují MLPA reakci. Více informací naleznete v části o zpracování DNA vzorku v MLPA obecném protokolu. Referenční vzorky Referenční vzorky DNA by měly být odvozeny ze stejného typu tkáně, zpracovány za použití stejného postupu a připraveny za použití stejného způsobu, jako jsou DNA vzorky z pacienta. Referenční vzorky by měly být odvozeny od zdravých jedinců. Další informace týkající se výběru a použití referenčních vzorků lze nalézt v MLPA obecném protokolu. Pozitivní kontrolní DNA vzorky MRC-Holland nemůže poskytnout pozitivní vzorky DNA. Zahrnutí pozitivního vzorku v každém experimentu je doporučeno. Institut Coriell ( a DSMZ ( mají různorodou sbírku biologických zdrojů, které mohou být použity jako pozitivní kontrolní DNA vzorek ve vašich MLPA experimentech. Vzorky s identifikačním číslem HG00097, HG01095, HG01500, HG01685, NA19789 a NA20522 od Institutu Coriell byly

5 testovány v MRC-Holland a mohou být použity jako pozitivní kontrolní vzorek (y) k detekci heterozygotní mutace MUTYH p.g396d. Kvalita buněčných linií se může měnit, proto by měly být vzorky validovány před použitím. Pro určení mutační zátěže mutací p.y179c a p.g396d by měl být použit pozitivní vzorek stejné kvality. SALSA SD022 Binning DNA SD022 Binning DNA dodávaná s tímto kitem může být použita jako Binning DNA vzorek pro binování dvou mutace-specifických sond (sonda MUTYH SP0654-L23441 pro mutaci py179c a sonda MUTYH SP0655-L23442 pro mutaci p.g396d). SD022 Binning DNA je směs genomové DNA od zdravých jedinců a syntetické DNA, která obsahuje cílové sekvence detekované výše uvedenými sondami. Zahrnutí jedné reakce s 5 ul SDO22 Binning DNA v počátečních experimentech MLPA je zásadní, protože může být použito pro sdružování dat profilu píků pomocí Software Coffalyser.Net. Navíc Binning DNA by měla být zařazena do experimentu vždy, když byly aplikovány změny v nastavení přístroje kapilární elektroforézy (například když byly kapiláry obnoveny). Binning DNA by nikdy neměla být použita jako referenční vzorek v analýze dat MLPA, ani pro kvantifikaci mutačního signálu (signálů), protože pro tento účel slouží skutečné pozitivní vzorky od pacientů s mutací nebo z buněčné linie. Důrazně doporučujeme použít vzorek DNA a referenční vzorky DNA extrahováné stejnou metodou a odvozené ze stejného zdroje tkáně. Pro další informace prosím nahlédněte do popisu produktu SD022 Binning DNA. Tento výrobek je určen pouze pro výzkumné účely (RUO), s výjimkou případů, kdy je používán v kombinaci s kitem pro diagnostické účely in vitro (IVD), jak je uvedeno na konci tohoto popisu produktu. Charakteristika výkonu testu Clinical Utility Gene Card pro MUTYH uvádí, že delece nebo duplikace pro MUTYH jsou vzácné události, ale dvě běžné MUTYH mutace se však vyskytují u 80 % všech hlášených mutantních alel u jedinců severozápadní Evropy. Penetrance u bialelických nosičů mutací je až 100 %. Analytická citlivost a specificita pro MAP je téměř 100 %, pokud je použito sekvenování všech 16 exonů v kombinaci s MLPA. Na rozdíl od MAP je HMPS1 děděn dominantním způsobem. Bylo prokázáno, že HMPS1 je způsoben duplikacemi 3 'konce genu SCG5 a upstream oblasti GREM1 lokusu (Jaeger et al.2012, Rohlin a kol. 2015). Tento kit obsahuje sedm sond zaměřených na tuto oblast, viz Tabulka 1 a Tabulka 2b pro více informací.

6 Analytická výkonnost může být ohrožena: SNP nebo dalšími polymorfismy (např. indels) v cílové sekvenci DNA, nečistotami ve vzorku DNA, neúplnou DNA denaturací, použitím nedostatečného nebo příliš velkého množství vzorku DNA, použitím nedostatečných nebo nevhodných referenčních vzorků, problémy s kapilární elektroforézou nebo špatným postupem normalizace dat a dalšími technickými chybami. MLPA obecný protokol obsahuje technické pokyny a informace o hodnocení/normalizaci dat. Analýza dat Coffalyser.Net software musí být použit pro analýzu dat v kombinaci s listem pro specifickou šarži - MLPA Coffalyser list. Nejnovější verze by měla být použita a je volně ke stažení na Použití jiného ne-proprietárního softwaru může vést k neprůkazným nebo falešným výsledkům. Pro více informací o MLPA kontrole kvality a analýze dat, viz Coffalyser.Net Manual. Interpretace výsledků Očekávané výsledky pro detekci MUTYH, SCG5 a GREM1 sond jsou počty kopií alel 2 (normální), 1 (heterozygotní delece) nebo 3 (heterozygotní duplikace). Počet kopií 4 (heterozygotní triplikace/homozygotní duplikace) nebo 0 (homozygotní delece) se mohou vyskytovat, ale jsou velmi vzácné. Standardní odchylka všech sond v referenčních vzorcích by měla být <0,10 a kvocient dávky (DQ) referenčních sond ve vzorcích pacientů by měl být mezi 0,80 a 1,20. Pokud jsou tato kritéria splněna, následující mezní hodnoty pro DQ sond mohou být použity k interpretaci výsledků MLPA pro autozomální a pseudo-autozomální chromozomy: - Uspořádání sond podle chromozomální polohy usnadňuje interpretaci výsledků a může odhalit menší změny, jako jsou změny pozorované v případech mozaiky. Analýza rodičovských vzorků může být nezbytná pro správnou interpretaci komplexních výsledků.

7 Falešně pozitivní výsledky Vezměte prosím na vědomí, že abnormality zjištěné jedinou sondou (nebo více po sobě jdoucích sond) mají stále značnou šanci být falešně pozitivní výsledek. Neúplná DNA denaturace (například z důvodu kontaminace solí) může vést ke snížení signálu sondy, zejména u sond umístěných v CpG ostrově nebo v blízkosti genů MUTYH, SCG5 a GREM1. Použití dalšího kroku čištění nebo alternativní metody extrakce DNA může takové případy vyřešit. Navíc, kontaminace DNA vzorků cdna nebo PCR amplikony z jednotlivých exonů mohou vést k falešně pozitivním duplikacím (Varga et al., 2012). Analýza nezávisle odebraného vzorku sekundární DNA může vyloučit tento typ artefaktů. - Normální počty kopií variant u zdravých jedinců jsou popsány v databázi genomových variant. Uživatelé by měli vždy konzultovat nejnovější aktualizaci databáze a vědecké poznatky při interpretaci jejich výsledků. - Ne všechny odchylky zjištěné MLPA jsou patogenní. V některých genech, intragenové delece jsou známy a vedou k velmi mírné nebo žádné chorobě (Schwartz et al., 2007). Pro mnoho genů, existuje více než jedna transkripční varianta. Změny v počtu kopií exonů, které nejsou přítomny ve všech transkripčních variantách, nemusí mít klinický význam. Duplikace, které zahrnují první nebo poslední exon genu (například exony 1-3), mohou v některých případech mít za následek inaktivaci této kopie genu. - Změny v počtu kopií detekované referenčními sondami nebudou mít pravděpodobně žádný vztah k testovanému onemocnění. - Stanovení mutačního zátěže: jako referenci pro mutace p.y179c a p.g396d použijte pozitivní vzorky stejné kvality jako má vzorek. Limitace metody Ve většině populací jsou hlavní příčinou genetických defektů v MUTYH genu malé (bodové) mutace, z nichž většina nebude detekována pomocí MLPA kitu P378 MUTYH.

8 MLPA nemůže zjistit žádné změny, které leží mimo cílovou sekvenci sond a nezjistí počet kopií neutrální inverze nebo translokace. I když MLPA nedetekuje žádné aberace, zůstává možnost, že existují biologické změny v tomto genu nebo chromozomální oblasti, ale zůstávají nedetekované. Změny sekvence (např. SNP, bodové mutace, malé indels) v cílové sekvenci sondy mohou způsobit falešně pozitivní výsledky. Mutace / SNP (i když> 20 nt od ligačního místa sondy) může snižovat signál sondy tím, že brání ligaci oligonukleotidové sondy nebo destabilizuje vazbu sondy na DNA. Při použití na vzorcích nádorů (pouze pro výzkum): Analýza MLPA na vzorcích nádorů poskytuje informace o průměrné situaci v buňkách, ze kterých byl purifikován vzorek DNA. Zisky nebo ztráty genomických oblastí nebo genů nemusí být zjištěny výše uvedeným DQ, pokud je procento nádorových buněk nízké a pokud je zde možnost subklonality. Navíc existuje vždy možnost, že jedna nebo více referenčních sond ukazuje počet změn kopií ve vzorku pacienta. Diagnostické použití P378 s DNA extrahovanou z nádorové tkáně nebylo validováno. Potvrzení výsledků Změny v počtu kopií detekované pouze jedinou sondou vždy vyžadují ověření jinou metodou. Zřejmá delece detekovaná jedinou sondou může být způsobena např. mutací / polymorfismem, který zabraňuje ligaci nebo destabilizuje vazbu sondy na DNA. Sekvenační analýza může stanovit, zda mutace nebo polymorfismy jsou přítomny v cílové sekvenci sondy. Nalezení heterozygotní mutace nebo polymorfismu poukazuje na to, že dvě odlišné alely jsou přítomné ve vzorku DNA a falešně pozitivní výsledek MPLA lze získat. Změny v počtu kopií detekované jednou nebo více než jednou po sobě jdoucích sond by měly být potvrzeny jinou nezávislou metodou, jako je long-range PCR, qpcr, array CGH nebo Southern blotting, kdykoli je to možné. Delece / duplikace delší než 50 kb mohou být často potvrzeny FISH. Databáze mutací MUTYH: Důrazně doporučujeme uživatelům ukládat pozitivní výsledky do MUTYH LOVD. Doporučení pro nomenklaturu popisující delece / duplikace jednoho nebo více exonů lze nalézt na adrese Prosím, oznamte změny v počtu kopií detekované referenčními sondami, falešně pozitivní výsledky kvůli SNP a neobvyklé výsledky (například duplikace MUTYH exonů 6 a 8, ale ne exonu 7) do MRC- Holland.

9 (a) Číslování exonů použité v tomto popisu kitu P378 MUTYH a v analýze listu P378 MUTYH a v Coffalyser.Net je identické s číslováním ve výše uvedených LRG sekvencí a NCBI NG sekvencí. * Nové ve verzi D1 (od šarže D dále).

10 Změněno ve verzi D1 (od šarže D dále). Malá změna v délce, žádná změna v detekované sekvenci. Sonda specifická pro mutaci. Tato sonda generuje pouze signál, pokud je přítomna mutace p.y179c. Tato sonda se skládá ze tří částí a má dvě ligační místa. Nízký signál této sondy může být způsoben depurinací vzorku DNA, např. v důsledku nedostatečné pufrovací kapacity nebo prodloužené doby denaturace. Sonda specifická pro mutaci. Tato sonda generuje signál pouze tehdy, je-li přítomna mutace p.g396d. Všimněte si toho, že sonda nemusí generovat signál, pokud je mutace p.g396d přítomna na stejné alele jako patogenní p.e410gfs * 43 mutace. Signál této sondy může být rovněž snížen v přítomnosti depurinace vzorku DNA, např. kvůli nedostatečné pufrovací kapacitě nebo prodloužené době denaturace. "Sonda se nachází v regionu bohatém na GC nebo v jeho blízkosti. Nízký signál může být způsoben kontaminací solí ve vzorku DNA, což vede k neúplné denaturaci DNA, zvláště u oblastí bohatých na GC. Δ Více variabilní. Tato sonda může být citlivá na určité experimentální změny. Aberantní výsledky by měly být hodnoceny pozorně. Ø Intronová sonda. Tato sonda je zaměřena na alternativní variantu transkriptu s použitím alternativního startovacího kodonu. Význam delecí nebo duplikací pro tyto sondy není jasný. ๑ Význam pouze delece exonu 1 není jasný, protože tento exon je nekódující. Sondy v rámci 40kb duplikace 3'-konce SCG5 a upstream oblasti GREM1, která může způsobit HMPS1 (Jaeger a kol., 2012). Poznámka: Číslování exonů MUTYH se změnilo. Od června 2014 jsme přijali NCBI číslování exonů, které je přítomno v sekvenci NG_ pro tento gen, které je podobné LRG číslování exonů (LRG_220). Toto číslování exonů se může lišit od literatury! Číslování exonů použité v předchozí verzi tohoto popisu produktu naleznete v závorkách v Tabulce 2a. Číslování exonů je od 01/2018, ale může být změněno (např. NCBI) po vydání tohoto popisu produktu.

11 (a) Číslování exonů použité v tomto popisu produktu P378-D1 a v analytických listech Coffalyser.Net je totožné s číslováním exonů v sekvenci LRG_220 a sekvenci NCBI NG_ (b) Ligační místa sond P378 MUTYH MLPA jsou indikována podle sekvence Refseq NM_ , obsahující 16 exonů. Pouze intronové sondy 238 a 427 nt jsou označeny podle sekvence NM_ a sekvence NM_ Použité sekvence NM jsou od 01/2018, ale mohou být změněny (např. NCBI) po zveřejnění tohoto popisu produktu. c) Pouze část sekvence sond je uvedena. Kompletní sekvence sond jsou k dispozici na stránce. Prosím, dejte nám vědět, pokud najdete nějaké chyby. Sonda specifická pro mutaci. Tato sonda generuje pouze signál, pokud je přítomna mutace p.y179c. Tato sonda se skládá ze tří částí a má dvě ligační místa. Nízký signál této sondy může být způsoben depurinací vzorku DNA, např. v důsledku nedostatečné pufrovací kapacity nebo prodloužené doby denaturace. Sonda specifická pro mutaci. Tato sonda generuje signál pouze tehdy, je-li přítomna mutace p.g396d. Všimněte si toho, že sonda nemusí generovat signál, pokud je mutace p.g396d přítomna na stejné alele jako patogenní p.e410gfs * 43 mutace. Signál této sondy může být rovněž snížen v přítomnosti depurinace vzorku DNA, např. kvůli nedostatečné pufrovací kapacitě nebo prodloužené době denaturace.

12 Ø Intronová sonda. Tato sonda je zaměřena na alternativní variantu transkriptu s použitím alternativního startovacího kodonu. Význam delecí nebo duplikací pro tyto sondy není jasný. Poznámka: Číslování exonů MUTYH se změnilo. Od června 2014 jsme přijali NCBI číslování exonů, které je přítomno v sekvenci NG_ pro tento gen, které je podobné LRG číslování exonů (LRG_220). Toto číslování exonů se může lišit od literatury! Číslování exonů použité v předchozí verzi tohoto popisu produktu naleznete v závorkách v Tabulce 2a. Číslování exonů je od 01/2018, ale může být změněno (např. NCBI) po vydání tohoto popisu produktu. (a) Číslování exonů použité v tomto popisu produktu P378-D1 a v analytických listech Coffalyser.Net je totožné s číslováním exonů v NCBI NG_ sekvenci pro SCG5 a v NCBI NG_ sekvenci pro GREM1. (b) Ligační místa sond P378 MUTYH MLPA jsou indikována podle sekvence NM_ pro SCG5, obsahující 6 exonů, a NM_ pro GREM1, obsahující 2 exony. Použité sekvence NM jsou od 01/2018, ale mohou být změněny (např. NCBI) po zveřejnění tohoto popisu produktu. c) Pouze část sekvence sond je uvedena. Kompletní sekvence sond jsou k dispozici na stránce. Prosím, dejte nám vědět, pokud najdete nějaké chyby. "Sonda se nachází v regionu bohatém na GC nebo v jeho blízkosti. Nízký signál může být způsoben kontaminací solí ve vzorku DNA, což vede k neúplné denaturaci DNA, zvláště u oblastí bohatých na GC.

13 Δ Více variabilní. Tato sonda může být citlivá na určité experimentální změny. Aberantní výsledky by měly být hodnoceny pozorně. ๑ Význam pouze delece exonu 1 není jasný, protože tento exon je nekódující. Sondy v rámci 40 kb duplikace 3'-konce SCG5 a upstream oblasti GREM1, která může způsobit HMPS1 (Jaeger a kol., 2012).

14 Reference Jaeger E et al. (2012). Hereditary mixed polyposis syndrome is caused by a 40-kb upstream duplication that leads to increased and ectopic expression of the BMP antagonist GREM1. Nat Genet. 44: Rohlin A et al. (2016). GREM1 and POLE variants in hereditary colorectal cancer syndromes. Genes Chromosomes Cancer. 55: Schouten JP et al. (2002). Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligationdependent probe amplification. Nucleic Acids Res. 30:e57. Schwartz M et al. (2007). Deletion of exon 16 of the dystrophin gene is not associated with disease. Hum Mutat. 28:205. Varga RE et al. (2012). MLPA-based evidence for sequence gain: pitfalls in confirmation and necessity for exclusion of false positives. Anal Biochem. 421: Vybrané publikace používající kit SALSA MLPA P378 MUTYH Aimé A et al. (2015). Somatic c. 34G>T KRAS mutation: a new prescreening test for MUTYHassociated polyposis? Canc Genet. 7: Castillejo A et al. (2014). Prevalence of germline MUTYH mutations among Lynch-like syndrome patients. Eur J Cancer. 50: Guarinos C et al. (2014). Prevalence and characteristics of MUTYH-associated polyposis in patients with multiple adenomatous and serrated polyps. Clin Cancer Res. 20: Morak M et al. (2014). Biallelic MUTYH mutations can mimic Lynch syndrome. Eur J Hum Genet. 22: Rohlin A et al. (2016). GREM1 and POLE variants in hereditary colorectal cancer syndromes. Genes Chromosomes Cancer. 55: Taki K et al. (2016). Mutation analysis of MUTYH in Japanese colorectal adenomatous polyposis patients. Fam Cancer. 15:

15 Historie produktu P378

16