Imunoterapie karcinomu prostaty pomocí dendritických buněk

Transkript

1 Imunoterapie karcinomu prostaty pomocí dendritických buněk Jiřina Bartůňková za kolektiv autorů Ústav imunologie, Urologická klinika, Onkol. a radioter. oddělení UK 2.LF a FN Motol SOTIO a.s.

2 Principy imunoterapie Indukce imunitní reakce namířené proti nádorové tkáni, vedoucí k eliminaci nádorových buněk/kontrole nádorového růstu Aktivní nespecifická- nespecifická aktivace imunitního systému (BCG, IL-2, interferony..) Aktivní specifická- aktivace efektorových mechanismů in vivo proti strukturám exprimovaným na povrchu nádorových buněk Nádorové vakcíny active cellular immunotherapy (ACI)

3

4 Interakce T lymfocytu a DC

5 DC-based vaccination

6 Efficiency and kinetics of irradiated tumor cells engulfment by DC HLA DR, CD107a, CD63 (LAMP-1, LAMP3) antibody-labeled DC PKH 26-labeled apoptotic tumor cells 4 H OF CO-CULTIVATION

7 Tumor antigen source: whole tumor cells from tumor cell lines killed in vitro by immunogenic cell death and selected according to evaluation of tumor Ag expression in clinical samples Immunogenic cell death Translocation of calreticulin Translocation of HSP90 Release of uric acid and HMGB1 Release of DNA and RNA molecules HMGB1 HMGB1 HMGB1 HMGB1 minutes to 1h 12-24h 18-24h 24h Expression of calreticulin and HSP proteins as signs of immunogenic cell death Bartůňková, J., Špíšek R.: Impact of Tumour Cell Death on the Activation of Anti-tumour Immune Response, In: Phagocytosis of Dying Cells:, Springer, 2009

8 CAL HSP90 HSP70 OV90 Immunogenic cell death procedure

9 Tumor antigen expression relative mrna expression relative mrna expression OV TOV-21G OV-90 PSMA SK-OV-3 OVCAR-3 NY-ESO-1 TOV-21G SK-OV-3 OVCAR-3 LNCaP LNCaP relative mrna expression relative mrna expression OV TOV-21G OV-90 PSA SK-OV-3 OVCAR-3 MAGE-A3 TOV-21G SK-OV-3 OVCAR-3 LNCaP LNCaP Her-2/neu relative mrna expression OV-90 TOV-21G SK-OV-3 OVCAR-3 LNCaP

10 Ovarian cancer patients PSMA PSA relative mrna expression relative mrna expression OV-90 TOV-21G SK-OV-3 OVCAR-3 LNCaP OV-90 TOV-21G SK-OV-3 OVCAR-3 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 LNCaP H1H2 H3 H4H5 H6 H7H8 H9 H10 H11 H12 H13 NY-ESO-1 H14 H15 H16 H17 H18 H19 H20 H21 H10 H11 H12 H13 H14 H15 H16 H17 H18 H19 H20 H21 H22 H23 H24 H22 H23 H24 H25 H26 H27 H28 H29 H30 H31 H32 H33 relative mrna expression relative mrna expression OV-90 TOV-21G SK-OV-3 OVCAR-3 LNCaP OV-90 TOV-21G SK-OV-3 OVCAR-3 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 MAGE-A3 LNCaP H1H2 H3 H4H5 H6 H7H8 H9 H10 H11 H12 H13 H14 H15 H16 H17 H18 H19 H20 H21 H22 H23 H24 H25 H26 H27 H28 H29 H30 H31 H32 H33 H10 H11 H12 H13 H14 H15 H16 H17 H18 H19 H20 H21 H22 H23 H24 Her-2/neu relative mrna expression OV-90 TOV-21G SK-OV-3 OVCAR-3 LNCaP H1H2 H3 H4H5 H6 H7H8 H9 H10H11 H12 H13H14 H15 H16H17 H18 H19H20 H21 H22H23 H24 H25H26 H27 H28H29 H30 H31H32 H33

11 Vakcína (Active cellular immunotherapy) z dendritických buněk DCVAC/PCa přípravek moderní buněčné terapie- Regulation (EC) No.1394/2007 zákon o léčivu výroba dle SVP GMP laboratoře Modifikace chráněné patenty

12

13 Certifikát správné výrobní praxe

14 Dvě klinické studie I/II s DCVAC/PCa schválené SÚKLem

15 Cancer immuno-editing Dunn et al 2002; Dunn et al 2004 Equilibrium phase - greatest benefit of immunotherapy The goal in advanced cancer patients - reversal from the escape phase back to the equilibrium stage Appropriate combination of tumor mass debulk and neutralization of tumorinduced immunosuppression

16 Study design hormone refractory stage (castrateresistant) Hormone refractory stage Leukapheresis D +0 Vaccine production Sterility and quality control Treg check CPA application Vaccine ready for application D+28 CHEMOTHERAPHY ( every 3 weeks) D+56 D+28 D+77 D+49 D+98 D+70 D+119 D+91 D+140 D+112 D+161 D dose 2. dose 3. dose 4. dose 5. dose 6. dose Follow up D+393 D dose 2. dose 3. dose 4. dose 5. dose D+28 D+42 D+63 D+105 D+147 D+0 D+14 D+35 D+77 D dose 7. dose 8. dose 9. dose 10. dose D+189 D+231 D+273 D+315 D+357 D+161 D+203 D+245 D+287 D+329 VACCINE APPLICATION (day 0, 14, 35 then every 6 weeks up to 10 doses)

17 Study design biochemical relapse Biochemical relapse Leukapheresis D+0 Vaccine production Sterility and quality control VACCINE APPLICATION Treg check CPA application Vaccine ready for application D+28 Follow up D+393 D dose D+28 D+0 2.dose D+42 D+14 3.dose D+70 D+42 4.dose D+98 D+70 5.dose D+126 D+98 6.dose D+154 D dose D+182 D dose D+210 D dose D+238 D dose D+266 D+238 (day 0,14, then every 4 weeks up to 10 doses)

18 Biochemical relapse- eligible patients RT PSA levels Time Department of Urology 2 nd Medical Faculty Prague

19 Klinické studie- DCVAC 254 dávek u 30 pacientů k Nežádoucí reakce max. st. I-II, bez lab. známek autoimunity nebo jiného toxického poškození (KO, biochemie ) aktivace T lymfocytů (HLA DR) aktivace PSA-specifických T lymfocytů migrace do lymfatických uzlin

20 right axilla 4h left axilla right axilla 24h left axilla Sledování migrace DC označených 111-In oxinem po aplikaci vakcíny pomocí scintict Figure 2 The figure shows Arrow shows the location of the caudal migration of the DC injection site Figure 1 The figure shows static scintigraphy images. Migration activity of radiolabelled DC (arrows) 4h and 24h after inoculation is visible caudally from the application side.

21 Figure 2 The fused SPECT/low-dose CT images obtained after 48 hours showed two draining lymph nodes in both axillae.

22 right axilla 4h left axilla right axilla 24h left axilla injection injection subcutaneous intradermal subcutaneous intradermal Figure 3 Caudal migration of radiolabelled DC is visible 4h and 24h after subcutaneous administration on the right axillary side.

23 right left radioactivity in the inguinal lymph node Figure 4 The fused SPECT/low-dose CT images after 48h showed radiopharmaceutical retention (arrows) in the right inguinal region.

24 Vaccination with LNCap loaded mature DCs induces tumor cells and PSA-specific T cells responses * * IFNg producers/ 2x10 5 T cells * * DCs loaded with: LNCap PSA N.D. 0 4/22/2008 6/26/2008 9/18/ /16/2008 Pre-vaccination Post-vaccination

25 Průběžné výsledky - studie biochemický relaps CaP Pacientů -studie 12/7 v./4 čeká LF/1.DC ø věk 62,2 /49-73/ GS3-1p, GS5-2p, GS6-6p, GS7-2p, GS9-1p. 10 dávek, mezi 1. a 2. dávkou 14 dní, dále 1x měsíčně

26 Study design biochemical relapse Biochemical relapse Leukapheresis D+0 Vaccine production Sterility and quality control VACCINE APPLICATION Treg check CPA application Vaccine ready for application D+28 Follow up D+393 D dose D+28 D+0 2.dose D+42 D+14 3.dose D+70 D+42 4.dose D+98 D+70 5.dose D+126 D+98 6.dose D+154 D dose D+182 D dose D+210 D dose D+238 D dose D+266 D+238 (day 0,14, then every 4 weeks up to 10 doses)

27 Studie HR/CRPC pacientů 14 celkem /akt. 10 v./ 1.DC 8/2008 z toho studie 4/2v./1 čeká LF, 1.DC ø věk 68.5 /58-82/ GS5-1p, GS6-1p, GS7-3p, GS8-2p, GS9-5p 10 dávek, kombinace s chemoterapií

28 Serologic response to combined chemo-immunotherapy in a patient with hormone refractory prostate cancer - patient Duration of combined chemoimmunotherapy PSA Medián přežití 9 měs 8/2008 dle nomogr. Memorial Cancer Slogan Inst. Přežití 17 měs.

29 Závěr DCVAC/PCa vykazuje dobrý bezpečnostní profil Buňky migrují po s.c. podání do lymfatických uzlin a aktivují imunitní mechanismy Tendence k delšímu přežití než předpokládanému u pokročilých HR v kombinaci s chemoterapií POUZE ROZSÁHLÉ KLINICKÉ STUDIE MOHOU PŘINÉST VALIDNÍ DATA

30 Poděkování Ústav imunologie UK 2. LF Rozkova Daniela Hromadkova Hana Fucikova Jitka Kayserova Jana Lastovicka Jan Podrazil Michal Ulcova Hana Budinsky Vit Horváth R. Sochorová K. Sediva Anna Bartunkova Jirina Spisek Radek Urologická klinika UK 2. LF a FNM Babjuk Marko Jarolim Ladislav Minarik Ivos Kawaciuk I. Klinika nukleární medicíny UK 2. LF a FNM Táborská H. Krajíčková I. SOTIO a.s. Onkol. a radioterap. Odd. FNM Linke Z. Prausova J. Kubackova K. Stadlman K. ÚHKT, Z.Gašová Výroba DCVAC/PCa realizace klinických studií 2011