Kapalná α-amyláza dle IFCC Vyznačuje Roche/Hitachi analyzátory, na kterých lze soupravy použít Kat. č. Nádobka Obsahuje MODULAR

Transkript

1 V5 Vyznačuje Roche/Hitachi analyzátory, na kterých lze soupravy použít Kat. č. Nádobka Obsahuje 90 9 MODULAR x 66 ml 6 x 6 ml x ml 6 x 0 ml x 50 ml 6 x ml Některé zobrazené analyzátory a soupravy nemusí být dostupné ve všech zemích. Pro další systémové aplikace kontaktujte místní zastoupení Roche Diagnostics. Česky Systémové informace Pro analyzátor Roche/Hitachi 9: ACN 570 Pro analyzátor Roche/Hitachi MODULAR P: ACN 570 (ne pro USA), ACN 566 (STAT) Použití Enzymatický in vitro test pro kvantitativní stanovení α-amylázy v lidském séru, plazmě a moči na automatizovaných analyzátorech klinické chemie Roche. Souhrn,,3,4,5,6,7,8,9 α-amylázy (,4-α-D-glukanohydrolázy, EC 3...) katalyzují hydrolytický rozklad polymerických uhlovodanů jako je amylóza, amylopektin a glykogen štěpením,4-α-glykosidických vazeb. Glykosidické vazby polysacharidů a oligosacharidů jsou většinou hydrolyzovány souběžně. Maltotrióza, nejmenší jednotka, je konvertována na maltózu a glukózu, ale velmi pomalu. Jsou známy dva typy α-amylázy, pankreatická (P-typ) a slinná (S-typ). Zatímco P-typ můžeme přiřadit jednoznačně ke slinivce a je orgánově specifický, S-typ pochází z různých míst. Vedle slinných žláz je možné se s ním setkat v slzách, potu, lidském mléce, plodové vodě, plicích, varlatech a epitelu vejcovodů. Jelikož specifické klinické symptomy pankreatických onemocnění jsou omezené, má stanovení α-amylázy důležitou úlohu při jejich diagnostice. Proto je především užívána pro diagnostiku a monitorování akutní pankreatitidy. Hyperamylasémie se nevztahuje jen na akutní pankreatitidu nebo zánětlivou fázi chronické pankreatitidy, ale vyskytuje se rovněž ve spojitosti s renálním selháním (omezená glomerulární filtrace), nádory na plicích, vaječnících, při plicních chorobách, onemocnění slinných žláz, diabetické ketoacidóze, cerebrálním traumatu, při chirurgických zásazích nebo v případech makroamylasémie. Specifičnost pro pankreas je doporučeno potvrdit doplňujícím vyšetřením specifického enzymu pro pankreas - lipázy nebo pankreatické α-amylázy. Stanovení α-amylázy bylo popsáno v četných metodikách. Jejich základem bylo stanovení poklesu substrátu měřením viskozity, turbidimetricky, nefelometricky a amyloklasticky nebo měřením degradačních produktů vznikajících sacharogenním nebo kinetickým způsobem, v enzymy katalyzovaných reakcích. Kinetická metoda zde popisovaná je založena na úplném rozštěpení 4,6-etyliden-(G 7 )-,4-nitrofenyl-(G )- α,d-maltoheptaosid (Ethylidene Protected Substrate = EPS) α-amylázou a následnou hydrolýzou všech degradačních produktů a uvolnění p-nitrofenolu s pomocí α-glukosidázy (00 % uvolnění chromoforu). Výsledky této metody korelují s výsledky naměřenými na HPLC. Princip testu (zjednodušeně) 0, Enzymatická kolorimetrická metoda dle IFCC Vzorek a přidání R Přidání R a zahájení reakce: α-amyláza 5 etyliden-g 7 PNP + 5 H O etyliden-g 5 + G PNP + etyliden-g 4 + G 3 PNP + etyliden-g 3 + G 4 -PNP Definované oligosacharidy jako 4,6-etyliden-(G 7 ) p-nitrofenyl-(g )-α,d-maltoheptaosid (etyliden-g 7 PNP) jsou štěpeny katalytickým účinkem α-amyláz. G PNP, G 3 PNP a G 4 PNP fragmenty, takto vytvořené, jsou úplně hydrolyzovány na p-nitrofenol a glukózu α-glukosidázou. G PNP + G 3 PNP + G 4 PNP + 4 H O (PNP = p-nitrofenol; G = glukóza) P α-glukosidáza Intenzita zabarvení uvolňovaného p-nitrofenolu je přímo úměrná aktivitě α-amylázy a je změřena fotometricky. D 5 PNP + 4 G Reagencie - pracovní roztoky R HEPES a pufr: 5,4 mmol/l, ph 7,00 (37 C); NaCl: 87 mmol/l; chlorid hořečnatý:,6 mmol/l; chlorid vápenatý: 0,075 mmol/l; α-glukosidáza (mikroorganismy): 4 ku/l; konzervans R HEPES a pufr: 5,4 mmol/l, ph 7,00 (37 C); 4,6-etyliden-G 7 PNP: mmol/l; konzervans, stabilizátor. a) HEPES = kys. -[4-(-hydroxyetyl)--piperazinyl]-etansulfenová Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření, nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Bezpečnostní listy jsou pro odborné uživatele dostupné na vyžádání. Zacházení s reagenciemi R: Připraveno pro použití R: Připraveno pro použití Uskladnění a stabilita Součásti neotevřené soupravy: Do data exspirace při -8 C R: 8 dní otevřená v chlazeném prostoru analyzátoru R: 8 dní otevřená v chlazeném prostoru analyzátoru Odběr vzorků a příprava 9, Sérum/plazma Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou přijatelné: Sérum Plazma: Li-, Na-, NH 4+ -heparin nebo EDTA plazma. (Hodnoty EDTA plazmy jsou o 5-0 % nižší než v séru). Stabilita: 3 7 dní při 5-5 C měsíc při -8 C Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn. že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. 00-, V 5 Česky / 5 Roche/Hitachi

2 Moč Odebírejte bez aditiv. Stabilita: 4 dny při 5-5 C 0 dní při -8 C α-amyláza je nestabilní v kyselé moči. Neprodleně zpracujte nebo před skladováním alkalizujte ph (okolo ph 7). Vzorky, obsahující precipitáty, centrifugujte před provedením testu. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Kalibrátor: C.f.a.s. (Calibrator for automated systems), Kat. č , (pro USA) Kontroly: Precinorm U, např. Kat. č , Precinorm U plus, Kat. č , (pro USA); Precipath U, např. Kat. č , Precipath U plus, Kat. č , (pro USA) 0,9% NaCl Celkové vybavení laboratoře Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny, uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v uživatelské příručce. Provádění aplikací, které nejsou schváleny Roche, je bez záruky a musí být definováno uživatelem. Kalibrace Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle reagencií Roche pomocí kalibrovaných pipet na manuálním fotometru, stanovením absolutních hodnot a specifické absorptivity substrátu, ε. S: 0,9% NaCl S: C.f.a.s. (Calibrator for automated systems) Frekvence kalibrace Dvoubodová kalibrace je doporučena: po změně šarže reagencií jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Kontrola kvality Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Potřebný materiál". Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Kontrolní intervaly a limity by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátor automaticky vypočítá aktivitu analytu pro každý vzorek. Převodní faktor: U/L x 0,067 = µkat/l Omezení - interference,5 Lehká změna žlutého zabarvení roztoku neinterferuje s využitím testu. Nepipetujte ústy a zajistěte, aby reagencie nepřišly do styku s pokožkou. (Sliny a pot obsahují α-amylázu!) Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ±0 % počáteční hodnoty. Ikterus: 6 Bez významných interferencí do hodnoty I indexu 60 (přibližná koncentrace nekonjugovaného bilirubinu: 60 mg/dl nebo 06 µmol/l). b Hemolýza: 6 Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 500 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 500 mg/dl nebo 30 µmol/l). b Lipémie (Intralipid): 6 Bez významných interferencí do hodnoty L indexu 500. b Mezi koncentrací triglyceridů a L indexem (odpovídá zákalu) je slabá korelace. Silně zakalené a výrazně lipemické vzorky mohou být označeny Abs. Antikoagulanty: Prokázána interference s citrátem a fluoridem. Glukóza: Bez interferencí glukózy do 000 mg/dl ( mmol/l). b Přibližně o 0 % nižší výtěžnost byla nalezena při koncentraci glukózy mg/dl (50 mmol/l). Kys. askorbová: Bez interferencí kys. askorbové do 00 mg/dl (5,68 mmol/l). b Přibližně o 0 % nižší výtěžnost byla nalezena při koncentraci kys. askorbové 880 mg/dl (50 mmol/l). Léčiva na základě icodextrinu mohou vést ke snížení hodnot amylázy. 3 běžně používaných léčiv bylo testováno in vitro. Nebyla zjištěna žádná interference. c Ve velmi vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. b) Měřeno při hladinách α-amylázy do 50 U/L (,50 µkat/l). c) Měřeno při hladinách α-amylázy do 75 U/L (,5 µkat/l). POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Při zpracovávání určitých kombinací testů v analyzátorech Roche/Hitachi je nezbytné používat speciální mycí cykly. Pro další pokyny čtěte nejnovější verzi Seznamu zamezení přenosu (carry-over) a příručku pro obsluhu. Uživatelé z USA naleznou pokyny pro speciální mycí cykly v dokumentu Special Wash Programming (umístěném na stránce MyLabOnline) a v příručce pro obsluhu. Tam, kde je to vyžadováno, musí být před vydáním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry-over). Limity a rozmezí Rozsah měření U/L (0,05-5,00 µkat/l) Vzorky s vyššími aktivitami měřte pomocí funkce rerun. Na přístrojích bez automatického opakování (rerunu), ručně nařeďte vzorek 0,9% roztokem NaCl, destilovanou/deionizovanou vodou (např. + 4). Výsledek vynásobte odpovídajícím faktorem ředění (např. 5). Vypočítaný rozšířený rozsah měření pomocí rerunu: Analyzátor Roche/Hitachi 9, ACN 566 (sérum/plazma), ACN 570 (sérum/plazma, moč), ACN (sérum/plazma): nařeďte :5 pomocí funkce rerun. Výsledky ze vzorků, naředěných funkcí rerun, jsou automaticky vynásobeny faktorem 5. Analyzátor Roche/Hitachi 9, ACN (moč), ACN 566 (moč): nařeďte : pomocí funkce rerun. Výsledky ze vzorků, naředěných funkcí rerun, jsou automaticky vynásobeny faktorem. Analyzátor Roche/Hitachi MODULAR P, ACN 566 (sérum/plazma), ACN 570 (sérum/plazma): nařeďte :3,5 pomocí funkce rerun. Výsledky ze vzorků, naředěných funkcí rerun, jsou automaticky vynásobeny faktorem 3,5. Analyzátor Roche/Hitachi MODULAR P, ACN 566 (moč), ACN 570 (moč): nařeďte : pomocí funkce rerun. Výsledky ze vzorků, naředěných funkcí rerun, jsou automaticky vynásobeny faktorem. Spodní limity měření Spodní detekční limit testu 3 U/L (0,05 µkat/l) Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky nad nejnižším standardem (standard + 3 SD, opakovatelnost, n = ). Roche/Hitachi / 5 00-, V 5 Česky

3 V5 Očekávané hodnoty 9 Sérum/plazma Muži/ženy 0,47-,67 µkat/l 8-00 U/L Spontánně Muži 0,7-8,0 µkat/l 6-49 U/L vyloučená moč Ženy 0,35-7,46 µkat/l -447 U/L α-amyláza/ Muži 0,97-4,73 µkat/g U/g podíl kreatininu Ženy,5-6,5 µkat/g U/g kvocient α-amyláza/kreatinin Kvůli potlačení vlivu odchylek aktivity α-amylázy v moči je vhodné stanovovat poměr α-amylázy/kreatininu. Přitom se stanovuje aktivita α-amylázy a koncentrace kreatininu ve vzorku spontánně odebrané moči. Poměr [U/g nebo µkat/mmol] = Poměr clearence amyláza/kreatinin (ACCR) α-amyláza [U/L nebo µkat/l] kreatinin [g/l nebo mmol/l] ACCR je vypočítáno na základě aktivity amylázy a koncentrace kreatininu. Oba vzorky, sérum i moč, musí být odebrány ve stejnou dobu. ACCR [%] = ACCR přibližně rovné -5 % Amyláza v moči [U/L] x kreatinin v séru [mg/l] Amyláza v séru [U/L] x kreatinin v moči [mg/l] x 00 Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické údaje o využití Údaje o využití, typické pro analyzátory, jsou uvedeny níže. Výsledky, získané v různých laboratořích, se mohou lišit. Přesnost Přesnost byla stanovena použitím lidských vzorků a kontrol podle interního postupu. Opakovatelnost* (n = ), mezilehlá přesnost** (3 alikvoty na sérii, série denně, dní). Byly získány následující výsledky: Opakovatelnost* Mezilehlá přesnost** Vzorek Průměr SD VK Průměr SD VK U/L µkat/l U/L µkat/l % U/L µkat/l U/L µkat/l % Lidské sérum I 84,8,4 0,8 0,0,0 84,7,4,3 0,0,5 Lidské sérum II 335 5,59 0,0 0, ,66 4 0,07, Precinorm U 43,39 0,03,0 47,45 3 0,05, *Opakovatelnost = přesnost v sérii **Mezilehlá přesnost = celková přesnost / přesnost mezi sériemi / přesnost mezi dny Porovnání metod Sérum/plazma A převedenými na PNP hodnoty (x) poskytlo korelaci (U/L): y = 0,449x - 4,0 y = 0,450x - 4,78 τ = 0,974 r = 0,999 Počet stanovených vzorků lidských sér: 9 Aktivity vzorků byly v rozmezí 40 až 76 U/L (0,67 až 44,3 µkat/l). B. Uživatelé v USA nepřevedenými na PNP hodnoty (x) poskytlo korelaci (U/L): y =,08x +,4 y =,08x + 3, τ = 0,995 r = 0,999 Počet stanovených vzorků lidských sér: 5 Aktivity vzorků se pohybovaly v rozmezí 6,4 až 396,5 U/L (0,7 až 3,3 µkat/l). Moč A převedenými na PNP hodnoty (x) poskytlo korelaci (U/L): y = 0,447x - 0,969 y = 0,448x -,87 τ = 0,98 r = 0,999 Počet stanovených vzorků lidské moči: Aktivity vzorků byly v rozmezí 38 až 747 U/L (0,6 až 9, µkat/l). B. Uživatelé v USA nepřevedenými na PNP hodnoty (x) poskytlo korelaci (U/L): y =,5x +,7 y =,4x + 3,7 τ = 0,98 r =,000 Počet stanovených vzorků lidské moči: 5 Aktivity vzorků byly v rozmezí 7,8 až 49,8 U/L (0,3 až 0,9 µkat/l). Odkazy. Greiling H, Gressner AM, eds. Lehrbuch der Klinischen Chemie und Pathobiochemie, 3 rd ed. Stuttgart/New York: Schattauer Verlag, Keller H, ed. Klinisch-chemische Labordiagnostik für die Praxis, nd ed. Stuttgart/New York: Georg Thieme Verlag, 99; Salt WB II, Schenker S. Amylase - its clinical significance: a review of the literature [Review]. Medicine 976;55: Steinberg WM, Goldstein SS, Davies ND et al. Diagnostic assays in acute pancreatitis [Review]. Ann Intern Med 985;0: Tietz NW, Huang WY, Rauh DF et al. Laboratory tests in the differential diagnosis of hyperamylasemia. Clin Chem 986;3: Junge W, Troge B, Klein G et al. Evaluation of a New Assay for Pancreatic Amylase: Performance Characteristics and Estimation of Reference Intervals. Clin Biochem 989; : Rauscher E et al. Fresenius Z Analyt Chem 986;34: Kruse-Jarres JD, Hafkenscheid JCM, Hohenwallner W et al. Evaluation of a New α-amylase Assay Using 4,6-Ethylidene-(G 7 )--4-nitrophenyl-(G )-α-d-maltoheptaoside as Substrate. J Clin Chem Clin Biochem 989;7: Junge W, Wortmann W, Wilke B et al. Development and Evaluation of Assays for the Determination of Total and Pancreatic Amylase at 37 C according to the Principle recommended by the IFCC. Clin Biochem 00; 34: Lorentz, K. Approved Recommendation on IFCC Methods for the Measurement of Catalytic Concentration of Enzymes. Part 9. IFCC Method for α-amylase (,4-α-D-Glucan 4-Glucanohydrolase, EC 3...). Clin Chem Lab Med 998; 36: Kurrle-Weitenhiller A, Hölzel W, Engel D et al. Method for the determination of total and pancreatic α-amylase based on 00 % cleavage of the protected substrate ethylidene-4-nitrophenyl-maltoheptaoside. Clin Chem 996;4(S6):S98.. Young DS. Effects of Preclinical Variables on Clinical Laboratory Tests. AACC Press, 997, nd edition. 3. Tietz NW, ed. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3 rd ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders Company; 995: Hohenwallner W, Hägele EO, Scholer A et al. Ber Öster Ges Klin Chem 983;6: Gokal R. Metabolic and laboratory effects of icodextrin, Kidney Int 00;6; Suppl. 8: Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 986;3: Passing H, Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 988;6: , V 5 Česky 3 / 5 Roche/Hitachi

4 Nastavení přístroje Uživatelé z USA: Doplňující informace o ovládání vyhledejte v aplikačním letáku a dokumentu Special Wash Programming (umístěny na internetové stránce MyLabOnline). Uživatelé analyzátorů Roche/Hitachi 9 a MODULAR: Zadejte aplikační parametry prostřednictvím aplikační diskety nebo letáku s čárovými kódy. Analyzátor Roche/Hitachi 90 No. <Chemistry> STAT application Test Name Assay Code (Mthd) RATE A 3 Assay Code (. Test) 0 4 Reaction Time Assay Point Assay Point Assay Point Assay Point Wavelength (SUB) Wavelength (MAIN) 45 Sample Volume 0.0 R Volume 50 3 R Pos R Bottle Size Small 5 R Volume R Pos. 0 7 R Bottle Size Small 8 R3 Volume R3 Pos R3 Bottle Size Small Calib. Type (Type) Linear Calib. Type (Wght) 0 3 Calib. Conc. 0 4 Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Kalib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos S ABS 0 36 K Factor K Factor K3 Factor K4 Factor K5 Factor A Factor 0 4 B Factor 0 43 C Factor 0 44 SD Limit Duplicate Limit Sens. Limit S Abs. Limit (L) S Abs. Limit (H) Abs. Limit Abs. Limit (D/I) Increase 5 Prozone Limit 0 5 Proz. Limit (Upp/Low) Lower 53 Prozone (Endpoint) Expect. Value (L) Expect. Value (H) Instr. Fact. (a) 57 Instr. Fact. (b) 0 58 Key setting Data vložená obsluhou Více informací je uvedeno v příslušném návodu k použití určeném pro analyzátor, v odpovídajících aplikačních letácích a pokynech pro použití všech potřebných komponent. Roche/Hitachi 4 / 5 00-, V 5 Česky

5 V5 Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu. 00 Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 6, D Mannheim 00-, V 5 Česky 5 / 5 Roche/Hitachi